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雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)(Dual-luciferase reporter system)
利用熒光素酶與底物結(jié)合發(fā)生化學(xué)發(fā)光發(fā)光反應(yīng)的特性,把感興趣的基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因(firefly luciferase)的上游,構(gòu)成熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞,適當(dāng)刺激或處理后裂解細(xì)胞,測(cè)定熒光素酶活性。通過(guò)熒光素
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染(Transient transfection)
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染(transient transfection)是指將DNA導(dǎo)入真核細(xì)胞的方式之一。在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染中,重組DNA導(dǎo)入感染性強(qiáng)的細(xì)胞系以獲得目的基因暫時(shí)但高水平的表達(dá)。轉(zhuǎn)染的DNA不必整合到宿主染色體,可在比穩(wěn)定轉(zhuǎn)染較短時(shí)間內(nèi)收獲轉(zhuǎn)染的細(xì)
外源基因在細(xì)胞中表達(dá)可分為兩大類,一類是瞬時(shí)表達(dá),一類是穩(wěn)定表達(dá)(**表達(dá))。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達(dá)到高水平的水平,但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上,使宿主細(xì)胞可長(zhǎng)期表達(dá)目的基因。建立穩(wěn)
透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)
1932年Ruska發(fā)明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡,電子顯微鏡與光學(xué)顯微鏡的成像原理基本一樣,所不同的是前者用電子束作光源,用電磁場(chǎng)作透鏡。另外,由于電子束的穿透力很弱,因此用于電鏡的標(biāo)本須制成厚度約50nm左右的超薄切片。目前TEM
成骨誘導(dǎo),是指來(lái)自植床周邊宿主結(jié)締組織中的可誘導(dǎo)成骨前體細(xì)胞,在誘導(dǎo)因子的作用下可被誘導(dǎo)定向產(chǎn)生骨原細(xì)胞、成骨細(xì)胞。
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