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工作原理：

同時，為了減少內(nèi)在的變化因素（如：培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)目和活力的差別，細(xì)胞轉(zhuǎn)染和裂解的效率等）對實驗準(zhǔn)確性的影響，將帶有海腎熒光素酶基因（Rinilla luciferase）的質(zhì)粒（phRL-TK）作為對照質(zhì)粒與報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，提供轉(zhuǎn)染活力的內(nèi)對照，使測試結(jié)果不受實驗條件變化的干擾。

在測量過程中，當(dāng)加入熒光素酶檢測試劑II（LARII）時產(chǎn)生螢火蟲熒光信號，這樣測量螢火蟲熒光素酶報告基因。定量螢火蟲熒光強度之后，再在同一樣品中加入Stop & Glo^?，將上述反應(yīng)猝滅，并同時啟動海參熒光素酶反應(yīng)，同時進行第二次測量。

具體步驟：

⑴ 初次使用時，配制LAR II，即Firefly luciferase的底物。將LAR II溶解在LAR II buffer中，并分裝-80℃避光保存；

⑵ 轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞棄掉培養(yǎng)基，用PBS清洗兩次，每孔加入100 μl的PLB（Passive Lysis Buffer）室溫輕微振蕩15 min，收集細(xì)胞裂解液；

⑶ 將20 μl細(xì)胞裂解液加入發(fā)光板后，用GloMax生物發(fā)光檢測儀讀取背景值2 s；

⑷ 每樣品加入100  μl LAR II工作液，快速混勻，檢測讀數(shù)，即為Firefly luciferase的值；每樣品再加入100 ul Stop&Glo，快速混勻，再次讀數(shù)，即為Renilla luciferase的值。

⑸ 數(shù)據(jù)處理。首先計算出每管的Firefly luciferase/Renilla luciferase的比值，再以control組的比值為單位1，即可得到不同處理組的相對luciferase活性，也就是該處理組基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控活性。
客戶提供：
1.需提供詳細(xì)的轉(zhuǎn)錄因子、目的基因或microRNA信息；

2.實驗細(xì)胞，如無特殊要求，洛唯爾默認(rèn)為使用293T細(xì)胞，則無需提供；

*終交付：

實驗原始數(shù)據(jù)和實驗報告單。

服務(wù)案例：