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穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建

來源: | 作者:1 | 發(fā)布時(shí)間: 1752天前 | 739 次瀏覽 | 分享到:

外源基因在細(xì)胞中表達(dá)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)表達(dá)，一類是穩(wěn)定表達(dá)（**表達(dá)）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達(dá)到高水平的水平，但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上，使宿主細(xì)胞可長期表達(dá)目的基因。建立穩(wěn)定細(xì)胞株，一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選。

工作原理：

外源基因在細(xì)胞中表達(dá)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)表達(dá)，一類是穩(wěn)定表達(dá)（**表達(dá)）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達(dá)到高水平的水平，但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上，使宿主細(xì)胞可長期表達(dá)目的基因。建立穩(wěn)定細(xì)胞株，一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選。

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞細(xì)胞株包括多克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株和單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。慢病毒感染目的細(xì)胞后，通過抗性篩選得到的細(xì)胞株是多個(gè)細(xì)胞克隆的組合。單克隆細(xì)胞株是從多克隆細(xì)胞中經(jīng)細(xì)胞克隆挑選得到的，由一個(gè)細(xì)胞擴(kuò)增得到的細(xì)胞株。單克隆細(xì)胞株性狀統(tǒng)一，傳代過程中細(xì)胞的基因表達(dá)保持穩(wěn)定。

實(shí)驗(yàn)流程：