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背景知識(shí):
1932年Ruska發(fā)明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡(transmission electron microscope,TEM),電子顯微鏡與光學(xué)顯微鏡的成像原理基本一樣,所不同的是前者用電子束作光源,用電磁場(chǎng)作透鏡。另外,由于電子束的穿透力很弱,因此用于電鏡的標(biāo)本須制成厚度約50nm左右的超薄切片。目前TEM的分辨力可達(dá)0.2nm。
透射電鏡在生物學(xué)的主要應(yīng)用1、細(xì)胞學(xué)
由于超薄切片技術(shù)的出現(xiàn)和發(fā)展,人類利用透射電鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行了更深入的研究,觀察到了過(guò)去無(wú)法看清楚的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。例如,用透射電鏡觀察線粒體,自噬小體等。
2、發(fā)現(xiàn)和識(shí)別病毒
許多病毒,尤其是腫瘤病毒就是用透射電鏡發(fā)現(xiàn)的。透射電鏡也為病毒的分類提供了直觀的依據(jù),例如SARS病毒就是首先在透射電鏡下觀察到并確認(rèn)是病毒而不是支原體的。
3、臨床病理診斷
生物體發(fā)生疾病都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生形態(tài)和功能上的改變,通過(guò)對(duì)病變區(qū)細(xì)胞的透射電鏡觀察就可以為疾病診斷提供有力依據(jù)。例如目前透射電鏡在腎活檢、腫瘤診治中發(fā)揮了重要作用。
4、免疫學(xué)
電鏡技術(shù)與生命科學(xué)中新興起的技術(shù)相結(jié)合,促進(jìn)了新技術(shù)的應(yīng)用。例如電鏡技術(shù)與免疫學(xué)技術(shù)相結(jié)合產(chǎn)生了免疫電鏡技術(shù),它可以對(duì)細(xì)胞表面及細(xì)胞內(nèi)部的抗原進(jìn)行定位,可以了解抗體合成過(guò)程中免疫球蛋白的分布情況等。
樣品準(zhǔn)備:
取材固定:新鮮組織確定取材部位,盡量減小牽拉、挫傷與擠壓等機(jī)械損傷,1-3min內(nèi)取樣,組織塊面積不超過(guò)3mm2,用PBS輕輕漂洗將樣本表面的血污,毛發(fā)等去掉,保護(hù)好需要掃描的面并做好標(biāo)記(如在對(duì)面進(jìn)行剪角處理)。迅速投入電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存。
貼壁細(xì)胞:棄培養(yǎng)基,收集于EP管中,用PBS輕輕漂洗后,棄PBS加電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存。
客戶提供 :
人(動(dòng)物)組織或細(xì)胞,觀察視野部位及相關(guān)參考文獻(xiàn)。
*終交付:
電鏡圖片,實(shí)驗(yàn)報(bào)告單。
服務(wù)案例:
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