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RNA甲基化修飾（m6A）整體解決方案
來源: | 作者:1 | 發(fā)布時間: 1751天前 | 2036 次瀏覽 | 分享到:
已知RNA存在超過100種修飾。在真核生物中，5’端的Cap以及3’端的polyA修飾在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起到了十分重要的作用，而mRNA的內(nèi)部修飾則用于維持mRNA的穩(wěn)定性。mRNA*常見的內(nèi)部修飾包括N6-腺苷酸甲基化（m6A）、N1-腺苷酸甲基化（m1A）、胞嘧啶羥基化（m5C）等。RNA甲基化修飾約占所有RNA修飾的60%以上，而m6A是高等生物mRNA和lncRNAs上*為普遍的修飾。目前發(fā)現(xiàn)miRNA、circRNA、rRNA、tRNA和snoRNA上都發(fā)生m6A修飾。
RNA甲基化中的m6A首先在甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下對RNA上的腺嘌呤（A）進行m6A 修飾，再在去甲基化酶的作用下對已發(fā)生m6A修飾的RNA進行去甲基化修飾。*后發(fā)生m6A修飾的RNA通過被甲基化閱讀蛋白識別后，行駛下游的一系列功能，包括miRNA加工、mRNA出核翻譯及剪切等。每個標記都需要一個“寫入器（writer）”來放置，一個“擦除器（eraser）”消除，還需要“閱讀器（reader）”讀取。m6A修飾不僅會影響RNA剪接，還會影響翻譯和RNA穩(wěn)定性。

背景介紹：

已知RNA存在超過100種修飾。在真核生物中，5’端的Cap以及3’端的polyA修飾在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起到了十分重要的作用，而mRNA的內(nèi)部修飾則用于維持mRNA的穩(wěn)定性。mRNA*常見的內(nèi)部修飾包括N6-腺苷酸甲基化（m6A）、N1-腺苷酸甲基化（m1A）、胞嘧啶羥基化（m5C）等。RNA甲基化修飾約占所有RNA修飾的60%以上，而m6A是高等生物mRNA和lncRNAs上*為普遍的修飾。目前發(fā)現(xiàn)miRNA、circRNA、rRNA、tRNA和snoRNA上都發(fā)生m6A修飾。
RNA甲基化中的m6A首先在甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下對RNA上的腺嘌呤（A）進行m6A 修飾，再在去甲基化酶的作用下對已發(fā)生m6A修飾的RNA進行去甲基化修飾。*后發(fā)生m6A修飾的RNA通過被甲基化閱讀蛋白識別后，行駛下游的一系列功能，包括miRNA加工、mRNA出核翻譯及剪切等。每個標記都需要一個“寫入器（writer）”來放置，一個“擦除器（eraser）”消除，還需要“閱讀器（reader）”讀取。m6A修飾不僅會影響RNA剪接，還會影響翻譯和RNA穩(wěn)定性。

RNA甲基化酶類型總結(jié)：




m6A甲基化檢測方法：

1.LC-MS/MS：在液相質(zhì)譜的基礎(chǔ)上采用串聯(lián)質(zhì)譜，能夠獲得分子離子峰，可對堿基同時進行定性和定量分析；
2.m6A定量檢測試劑盒（比色法）：采用類似于ELISA抑制競爭免疫的方法，能夠定量檢測總RNA中m6A試劑；；
3.RNA甲基化定量檢測試劑盒（熒光法）：使用高效RNA結(jié)合液將總RNA綁定在孔板上，使用捕獲和檢測抗體對m6A進行檢測；
4.Dot blotting：將m6A修飾的RNA固定在尼龍膜上，然后用m6A抗體進行免疫反應(yīng)；
5.m6A-seq：使用帶有m6A抗體的免疫磁珠對發(fā)生m6A甲基化的mRNA片段進行富集，然后將富集到的mRNA片段純化后構(gòu)建高通量測序文庫進行上機測序。

RNA甲基化研究思路：



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RNA含量≥800μg或細胞數(shù)目≥109。



  
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