免疫印跡技術(shù)(Western blot )
來源:
|
作者:2
|
發(fā)布時間: 1752天前
|
690 次瀏覽
|
分享到:
蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot。它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實驗方法。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。
背景知識:
蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot。它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實驗方法。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。
技術(shù)原理:
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,然后利用抗體進(jìn)行檢測的方法。對已知表達(dá)蛋白,可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測,對新基因的表達(dá)產(chǎn)物,可通過融合部分的抗體檢測。
經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。
樣品準(zhǔn)備:
細(xì)胞/組織標(biāo)本:液氮中速凍保存或-80 ℃冰箱保存;
所有樣品的處理和保存過程中,避免反復(fù)凍融。
客戶需提供:
新鮮且足量的樣品,或提取的總蛋白,目的蛋白信息 ,一抗(包括抗體說明書)等。
*終交付:
實驗原始數(shù)據(jù),實驗報告單等。