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染色質(zhì)免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation, ChIP）

來源: | 作者:3 | 發(fā)布時間: 1713天前 | 1751 次瀏覽 | 分享到:

染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)的原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA復(fù)合物，并將其隨機(jī)切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。

基本原理：

甲醛處理細(xì)胞→收集細(xì)胞，超聲破碎→加入目的蛋白的抗體，與靶蛋白-DNA復(fù)合物相互結(jié)合→加入Protein A，結(jié)合抗體-靶蛋白-DNA復(fù)合物，共沉淀→對沉淀下來的復(fù)合物進(jìn)行清洗，除去一些非特異性結(jié)合→洗脫，得到富集的靶蛋白-DNA復(fù)合物→解交聯(lián)，純化富集的DNA-片斷→PCR分析