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實時熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR, qRT-PCR ）
來源: | 作者:2 | 發(fā)布時間: 1754天前 | 684 次瀏覽 | 分享到:
實時熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一種在DNA擴增反應(yīng)中，以熒光化學物質(zhì)測每次聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過內(nèi)參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。·

背景知識 ：

實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）是一種在DNA擴增反應(yīng)中，以熒光化學物質(zhì)測每次聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過內(nèi)參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法?！?/span>
Real-time PCR是在PCR擴增過程中，通過熒光信號，對PCR進程進行實時檢測。由于在PCR擴增的指數(shù)時期，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系，所以成為定量的依據(jù)。



樣品準備條件：
細胞樣品：液氮中速凍保存或速凍24 h后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存；或收集細胞后，根據(jù)細胞量，加入1-1.5 mL Trizol 溶解裂解細胞，再轉(zhuǎn)入-80冰箱保存。
組織樣品：動物組織標本立即放入液氮中速凍保存后可轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存；特殊組織（植物等）建議采用新鮮組織即刻提取RNA，逆轉(zhuǎn)合成cDNA后-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>
所有樣品的處理和保存過程中，切忌反復凍融。

客戶需提供 ：
新鮮且足量的樣品組織，細胞不少于106，或純化好的符合實驗要求的cDNA ，目的的基因信息 ，相關(guān)文獻等。
*終交付：
實驗報告單，qRT-PCR原始數(shù)據(jù)，擴增曲線，溶解曲線，數(shù)據(jù)分析結(jié)果等。

  
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